韩再芬出生在天柱山麓、潜山河畔的市区（安徽省安庆市潜山市）的一个普通的家庭。父亲是财政局的干部，母亲是黄梅戏演员。姐妹四人她最小，受母亲的影响，韩再芬在黄梅戏的熏陶下长大，10岁的时候她被安庆黄梅戏剧团录取，成为班里年纪最小的学生。一年后，在安庆地区青年演员基本功的比赛中，她就崭露头角，两年后她十二岁时就在团里挑大梁，担任《窦娥冤》的主角 。

1984年，韩再芬因主演黄梅戏电视连续剧《郑小姣》一举成名；同年，主演《天仙配》。

1987年，主演黄梅戏电视剧《女驸马》。

1989年，韩再芬迎来了自己事业上的第二个转折点；这一年，韩再芬策划创意的《徽州女人》剧目正式公演；截止2012年，这个剧目已经演出了近300场。

1990年主演的黄梅戏电视剧《桃花扇》和《孟丽君》连续获得《大众电视》戏曲片金鹰奖，其中《桃花扇》还夺得了飞天奖和美国的金猴奖；同年，韩再芬参加中央电视台春节联欢晚会。

1997年她主演的电影《徽商情缘》获得了国家的华表奖、五个一工程奖；同年，获得文化部授予的“青年专家”称号；此外，还获得了中宣部、文化部、中国文联颁发的文艺家“德艺双馨”称号。

1999年，因主演黄梅戏《徽州女人》荣获第十七届中国戏曲梅花奖、第九届文华表演奖等多项大奖；同年，《徽州女人》成为安徽省进京向国庆五十周年献礼剧目。

2001年，被上海同济大学艺术系聘为兼职教授。

2003年，当选第十届全国人大代表；12月16日，现代黄梅剧《公司》在北京长安大戏院首演  。

2004年2月，中国艺术研究院及戏曲研究所启动了“中国当代戏曲表演艺术家系列研究工程”，将韩再芬列为首位研究对象；同年，还获得了中宣部、文化部、中国文联颁发的文艺家“德艺双馨”称号。

2004年出任中央文明办“诚信中国·诚信形象大使”；英国《世界经理人》杂志与人力资源测评机构世界HR实验室（WHL）“2004中国最有影响力女性100名（综合）”，位列75名，系唯一上榜戏曲演员；中国艺术研究院戏曲研究所启动“中国当代戏曲表演艺术家系列研究工程”，将韩再芬列为首位研究对象；同年6月，韩再芬与杜源联合主演，由王培公编剧（刘斯奋原著）、王延松导演，广州话剧院出品的大型史诗话剧《白门柳》在北京保利剧院连演七场。

2005年12月，安庆市黄梅戏二团更名为安庆再芬黄梅艺术剧院，韩再芬出任院长；是改革开放以来，中国戏剧界第一家以个人命名的剧院。

2009年国庆前夕，迎接建国60周年，中国网“新中国最有影响力文化人物”网络评选活动揭晓，在文学、影视、音乐、美术、戏剧、舞蹈、曲艺、文化学者8大类192位候选人中，韩再芬以高票位居戏剧类榜首，而在总排行榜中，韩再芬位列第四；10月，第五届中国黄梅戏艺术节在安庆开幕；同日，全国唯一一家黄梅戏专题博物馆——— 安徽中国黄梅戏博物馆在安庆建成。

2009年，获得国家级“非物质文化遗产保护”先进工作者，荣获安徽省教育厅教学成果一等奖，“庆祝新中国成立60周年最有影响力文化人物”网络评选总人气榜第4名、戏剧排行榜第一名；同年年底，韩再芬黄梅艺术基金会正式成立，韩再芬担任黄梅艺术基金会理事长、安徽再芬黄梅艺术股份有限公司董事长。

2010年11月，韩再芬的表演艺术史和她所代表的黄梅戏艺术形式，作为世界不同文化的经典被美国国会图书馆记录和永久收藏，韩再芬成为新中国成立以来第一位入选该项目的中国戏剧艺术家；同年，还获得了全国劳动模范和先进工作者称号，出任安徽省消防形象大使，率再芬剧院赴美访演、文化交流，在美国国会图书馆演讲，接受美国国家民俗中心访问纪录，其演艺资料被美国国会图书馆永久收藏。

2013年5月15日至17日，由由知名导演王延松执导、著名黄梅戏表演艺术家韩再芬主演的大型原创黄梅戏舞台剧《徽州往事》在全国进行巡演。《徽州往事》比之韩再芬前作《徽州女人》，更具前卫和现代色彩。

2014年8月26日至28日，由韩再芬主演、安庆再芬黄梅艺术剧院的黄梅戏舞台剧《徽州往事》在北京国家大剧院上演。

2015年5月，韩再芬凭借在《徽州往事》中的精湛表演，继2000年获得中国戏剧“梅花奖”后“梅开二度”，成功为黄梅戏摘得第一朵“二度梅”，同时也成为安徽省第一位“二度梅”得主  。

2015年7月，安徽再芬黄梅文化艺术股份有限公司领衔出品电视剧《后台很火》，由黄梅戏表演艺术家韩再芬担任主创。

2022年1月30日，参加《2022安徽卫视春晚》。

2022年1月31日，参加中央广播电视总台春节联欢晚会，在戏曲《生生不息梨园情》中表演黄梅戏。

社会任职

第五届、六届、七届全国文艺工作者代表大会代表，第四届、五届全国戏剧家代表大会代表，第十届、十一届、十二届、十三届全国人大代表，安徽省政协常委。

现任安庆再芬黄梅艺术剧院院长，兼中国文联戏剧家协会副主席、安徽省文联副主席、省戏剧家协会主席、安庆市文联主席、市戏剧家协会主席。

2018年1月，当选为第十三届全国人民代表大会代表。

2020年12月，受聘担任安庆师范大学黄梅剧艺术学院院长。  

2020年12月15日，当选中国戏剧家协会第九届副主席。

2022年7月15日，韩再芬受聘中国科学技术大学，成为中国科学技术大学首位“驻校艺术家”。